1、酚/氯仿抽提法
1956年發(fā)明,通過酚/氯仿處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分,在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì),蛋白質(zhì)位于兩相之間。酚/氯仿抽提的優(yōu)勢是成本低,對實驗條件要求較低。提取的DNA保持天然狀態(tài)。獲得的DNA純度高、片段大、效果好,缺點是操作較為繁瑣。
2、醇沉淀法
乙醇能夠消除核酸的水化層,使帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)暴露出來,NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團(tuán)結(jié)合,形成沉淀。
3、層析柱法
通過特殊硅基質(zhì)吸附材料,能夠特定吸附DNA,而RNA和蛋白質(zhì)順利通過,然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸,低鹽高PH值洗脫,來分離純化核酸。
4、熱裂解堿法
堿法提取主要是利用共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離他們,在堿性下,變性蛋白是可溶的。
5、煮沸裂解法
加熱處理DNA溶液,利用線性DNA分子的特性,通過離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。煮沸裂解法提取DNA,得量少,雜質(zhì)多,DNA可能會出現(xiàn)斷裂,主要適用于一些粗略的實驗。
6、納米磁珠法
運(yùn)用納米技術(shù)對超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。
7、濃鹽法:高鹽沉淀法是酚氯仿抽提方法的一個變種,利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離。優(yōu)點事省略了酚氯仿抽提操作的麻煩,并且?guī)缀蹩朔朔勇确鲁樘岱椒ǖ囊磺腥秉c,只是得到DNA的純度不夠穩(wěn)定。
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